煮沸裂解法制备质粒DNA实验 | 國產維生素膠囊大剖析

煮沸裂解法小量制备质粒DNA.实验原理.经TritonX-100、溶菌酶和加热处理可从小量（1~2ml)细菌培养物 ...

1. 缓冲液和溶液

(1) 用于筛选质粒的抗生素

(2) 氯霉素（34 mg/ml）

(3) 乙醇

(4) 异丙醇

(5) STE

(6) STET

(7) TE ( pH 8.0 )

2. 酶和缓冲液

(1) 溶菌酶（10 mg/ml )

(2) 限制性内切核酸酶

3. 凝胶

琼脂糖凝胶

4. 培养基

LB、YT 或 Terrific 培养液

5. 离心机和转头

Beckman SW41 Ti 转头或与之相当转头；Sorvall GSA 转头或与之相当转头；Sorvall SS-34 转头或与之相当转头。

6. 特殊设备

沸水浴、本生灯、纱布（4层）。

二、方法

1. 细胞的制备

(1) 挑取转化细菌的单菌落或 0.1~1.0 ml 单菌落的培养物，接种到 30 ml 含适当抗生素的培养液（LB、YT 或 Terrific 培养液）中。

为了确保培养物通气良好：试管的体积应该至少比细菌培养物的体积大 4 倍；试管不宜盖紧；培养过程中要在 250 r/min 下剧烈振摇。

(2) 在适当的温度及摇速（250 r/min ) 下培养菌液直至对数生长期晚期（OD600 约为 0.6 )。

(3) 在 2 L 的烧瓶中，将 25 ml 对数生长期晚期的菌液接种到含适当抗生素的 500 ml 的培养基（LB...